Studija koja ima za cilj da razvije jeftinu, brzu tehniku detekcije za široko otkrivanje i skrining oralnih mikroorganizama pogodnih za smeštaj na mestu zbrinjavanja predstavljena je na 102. Generalnoj sednici IADR-a, koja je održana u vezi sa 53. Sastanak Američkog udruženja za stomatološka, oralna i kraniofacijalna istraživanja i 48. godišnji sastanak Kanadskog udruženja za stomatološka istraživanja, 13-16. marta 2024. u Nju Orleansu, LA, SAD.
Apstrakt, „Brzo specifično otkrivanje oralnih patogena korišćenjem dijagnostike zasnovane na CRISPR-u“ predstavljen je tokom usmene sesije „Kraniofacijalne dijagnostičke nauke“ koja se održala u petak, 15. marta 2024. u 8:00 po centralnom standardnom vremenu (UTC-6).
Studija Batbilega Bora sa ADA Forsith instituta, Kembridž, MA, SAD, prilagodila je novu dijagnostičku platformu zasnovanu na CRISPR-Cas-u Specifično visokoosetljivo enzimsko otključavanje reportera (SHERLOCK) za specifičnu detekciju oralnih bakterijskih patogena i ljudi nukleinske kiseline papiloma virusa (HPV).
Istraživači su razvili kompjuterski cevovod koji je sposoban da generiše vodič-RNA i genske prajmere specifične za vrstu pogodne za SHERLOCK. Ovi konstrukti su sintetizovani pomoću sistema biosinteze bez ćelija, a njihova specifičnost i osetljivost su eksperimentalno potvrđeni očitavanjem fluorescencije reporterskih RNK.
Studija je postigla detekciju oralnih bakterija unutar raspona jednog molekula koji je ostao specifičan u prisustvu DNK koji nije bio cilj koji se nalazi u pljuvački. Štaviše, test je poboljšan za otkrivanje uobičajenih oralnih patogena (npr. P. gingivalis, F. nucleatum) direktno iz neobrađenih uzoraka pljuvačke. Rezultati detekcije, kada su testirani na 30 uzoraka pljuvačke pacijenata, u potpunosti su usklađeni sa rezultatima drugih metoda detekcije kao što su kPCR i sekvenciranje 16S rRNA. Kao dokaz principa, istraživači su takođe posebno detektovali HPV sojeve 6, 11, 16, 18, 33 i 35 iz gDNK pozadine.
Ovaj metod otkrivanja oralnih patogena je veoma skalabilan i može se lako optimizovati za primenu u ustanovama za lečenje. Detekcija traje otprilike 35 minuta ili manje, izuzetno je niska cena i ne zahteva posebne veštine ili tehnike za pokretanje. Pošto SHERLOCK cilja na sekvence nukleinskih kiselina specifično, budući testovi se mogu razviti za otkrivanje drugih mikroorganizama (gljivica i arheja) kao i proizvoda ljudskih gena.
